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              流式細胞儀檢測細胞流程

              發布時間:2022-03-14      點擊次數:278
                流式細胞儀檢測細胞實驗步驟:
               
                1. 細胞收集:懸浮細胞直接收集到10ml的離心管中,每樣本細胞數為(1~5)×106,/mL 500~1000r/min離心5min,棄去培養液。
               
                2. 用孵育緩沖液洗滌1次,500~1000r/min離心5min。
               
                3. 用100ul的標記溶液重懸細胞,室溫下避光孵育10~15min。
               
                4. 500~1000r/min離心5min沉淀細胞孵育緩沖液洗1次。
               
                5. 加入熒光(SA-FLOUS)溶液4℃下孵育20min,避光并不時振動。
               
                6. 流式細胞儀分析:流式細胞儀激發光波長用488nm,用一波長為515nm的通帶濾器檢測FITC熒光,另一波長大于560nm的濾器檢測PI。
               
                7. 結果判斷:凋亡細胞對所有用于細胞活性鑒定的染料如PI有抗染性,壞死細胞則不能。細胞膜有損傷的細胞的DNA可被PI著染產生紅色熒光,而細胞膜保持完好的細胞則不會有紅色熒光產生。因此,在細胞凋亡的早期PI不會著染而沒有紅色熒光信號。正?;罴毎c此相似。在雙變量流式細胞儀的散點圖上,左下象限顯示活細胞,為(FITC-/PI-);右上象限是非活細胞,即壞死細胞,為(FITC+/PI+);而右下象限為凋亡細胞,顯現(FITC+/PI-)。
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